通過(guò)對(duì)擬南芥或水稻穗的研磨來(lái)提取dna的實(shí)驗(yàn)方法

對(duì)擬南芥或水稻穗進(jìn)行研磨破碎，進(jìn)而提取其DNA。

實(shí)驗(yàn)原理

通過(guò)研磨珠的撞擊，充分?jǐn)M南芥或水稻穗細(xì)胞，使其內(nèi)容物流出，進(jìn)而提取目標(biāo)成分。

實(shí)驗(yàn)材料和器具

樣品：擬南芥或水稻穗

儀器：全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-48）

耗材：離心管，不銹鋼研磨珠（上海凈信）

試劑：TPS溶液（100mM Tris-Cl (pH 8.0)，10mM EDTA (pH 8.0)，1M KCl）

實(shí)驗(yàn)步驟

1.取一片擬南芥的葉片（或10d左右的小苗），加入兩毫升EP管中。

2.加鋼珠1顆

3.加TPS提取液0.02ml

4.設(shè)置研磨儀參數(shù)10單位頻振，1min。（水稻嫩葉設(shè)置45S，12單位頻振；老葉設(shè)置70S，12單位頻振）

5.離心（4000rpm，1min），將打碎的組織和提取液一起轉(zhuǎn)移至96孔板中。

6.96孔板加蓋子，75°加熱15min

7.大離心機(jī)高轉(zhuǎn)速10min

8.取上清，轉(zhuǎn)入另一塊96孔板，加入等體積的異丙醇。

9.加蓋子，混勻

10.4°下10min或-20°下10min，如材料很多此步驟可省略。

11.最高轉(zhuǎn)速離心10min。

12.棄上清，加入0.04ml 70%乙醇。

13.最高轉(zhuǎn)速離心10min

14.棄去乙醇，37°放置20-30min烘干

15.加入0.016ml水，65°放置10min

16.離心除去氣泡，之后可以直接用于PCR實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.-20°下該方法的DNA可以保存4個(gè)月以上，4°大致可以放2-3周。